在液相色譜儀定量分析中，分離開是首要要求。基線分合是需要準確后果的有效保證含有5個組分或者更少的樣品，使譜峰之間到達分數(shù)線結(jié)合（R＞1.5)正常較為簡單。
液相色譜儀
分離度會隨色譜柱的使用時間逐步降低，也會由于分離條件的微小波動而在不同時間有所變化，因此在建立簡單混合物的分離方法時，好使R≥2。
這樣的分離度將有利于改善測試精度和方法的普適性；含10團種或10種以上組分的樣品，分離一般會很困難，目標分離度往往必須降低至R＞1.0—1.5。
有些HPLC測定不必使全部被測組分達到基線分離，這種情況常見于所測樣品中可能存在數(shù)種化合物但僅需檢測其中的一種時。比如在普查水或土壤樣品中的某污染物(如定性分析不同的除芳劑)時，僅需要分離出個別除莠劑，確定其特征保留時間進行峰鑒別即可。
盡管大多數(shù)HPLC設備能在更高的壓力下工作，使用新色譜柱的工作壓力不應超過170bar（2500psi,17MPa），壓力上限好在2000psi以下。
限制該壓力基于兩點原因：第一.隨著色譜柱的使用，微粒雜質(zhì)會逐步堵塞柱頭，使柱壓成倍升高；
第二.較低的壓力（<170bar）適于泵、進樣閥、尤其是自動進樣裝置的穩(wěn)定工作密封墊的壽命更長，液相色譜儀色譜柱堵塞的情況減少，系統(tǒng)的耐久性明顯提高。因此，好以小于泵的大允許壓力的50%作為目標壓力。
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